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鼎國自產(chǎn) 動物組織 DNA 提取試劑盒

簡要描述:

本試劑盒采用自主研發(fā)的*裂解液和酶相結(jié)合的方法裂解材料,具有效率高、性能穩(wěn)定、重復性高、速度快等特點。材料被裂解并、經(jīng)蛋白酶K消化后,DNA在高鹽低pH的條件下,與硅基質(zhì)膜特異性結(jié)合,在低鹽高pH值條件下,吸附的DNA被洗脫下來。本試劑盒適用于各種動物組織、動物細胞和血液基因組DNA的提取。提取的基因組DNA可以直接用作PCR模板、酶切、雜交等分子生物學實驗。

更新時間:2024-06-12

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鼎國自產(chǎn) 動物組織 / 細胞 / 血液基因組 DNA 提取試劑盒 ;350元 

純化效果檢測

取2-5μl得到的DNA產(chǎn)物,0.7%agarose電泳檢測DNA分子的完整性和紫外分光光度計檢測濃度和純度。
DNA在260nm處有吸收峰,檢測時應該使OD260值在0.1到1.0之間數(shù)值較準確。
OD260為1時大概相當于50μg/ml雙鏈DNA,40μg/ml單鏈DNA。
核酸濃度(μg/ml)=OD260×50×稀釋倍數(shù)。
OD260/OD280的值應該為1.7~2.0。
常見問題分析:

 常見問題可能原因建議
柱子堵塞裂解消化不充分適當延長Proteinase K消化時間。
樣品過多樣品量不要超過說明書所定zui大量;可適當增加Proteinase K的用量
DNA產(chǎn)量低將沉淀倒入柱子導致柱子堵塞加大轉(zhuǎn)速和延長離心時間
Wash buffer A、Wash buffer B沒有加無水乙醇按說明書加入無水乙醇
洗脫效率低洗脫液使用前于55-65℃預熱;洗脫液pH值不合適,應保證在7.5~8.5
樣品裂解不*適當延長裂解時間。
樣品不夠新鮮盡量使用新鮮樣品
DNA純度低消化不*樣品量不要超過規(guī)定范圍;延長消化時間,使樣品充分消化
洗滌不當嚴格按照說明書步驟洗脫
乙醇未除干凈適當延長晾干時間,使乙醇充分揮發(fā)

產(chǎn)品簡介:
本試劑盒采用自主研發(fā)的*裂解液和酶相結(jié)合的方法裂解材料,具有效率高、性能穩(wěn)定、
重復性高、速度快等特點。材料被裂解并、經(jīng)蛋白酶K消化后,DNA在高鹽低pH的條件下,
與硅基質(zhì)膜特異性結(jié)合,在低鹽高pH值條件下,吸附的DNA被洗脫下來。
本試劑盒適用于各種動物組織、動物細胞和血液基因組DNA的提取。
提取的基因組DNA可以直接用作PCR模板、酶切、雜交等分子生物學實驗。
組成:
 

成分50注意事項
RNase A0.5 ml-20℃保存
Proteinase K0.5 ml-20℃保存
Lysis Buffer A35 ml室溫低時可能有白色沉淀產(chǎn)生,加熱溶解即可
Lysis Buffer B25 ml 
Wash buffer A27 ml用前加入18 ml 無水乙醇,充分混勻
Wash buffer B16 ml用前加入64 ml無水乙醇,充分混勻
Elution Buffer10 ml 
離心柱50個單個zui大吸附量20 μg
紅細胞裂解液50ml4℃


 

 

 

 

 

 

 

 

可選試劑

編號品名規(guī)格價格
NEP033紅細胞裂解液100ml40.00


 實驗前試劑準備

 Wash buffer A中加入18 ml 無水乙醇,充分混勻。
 Wash buffer B中加入64 ml無水乙醇,充分混勻。
 儲存條件:  請按照上表中注意事項的條件保存,其他未說明的可常溫或4度保存。
 步驟:
 1、樣品處理
 全血:取50-300 μl全血,加入3倍體積的紅細胞裂解液,震蕩混勻,12000rpm離心1min,
 去上清。加入600 μl Lysis Buffer A,震蕩混勻。
 禽血:加入10-100 μl禽血,直接加入600 μl Lysis Buffer A,顛倒混勻。
 動物組織:取20-50mg動物組織,液氮研磨或勻漿,加入100 μl PBS重懸樣品,
 然后加入到準備好的600 μl Lysis Buffer A,振蕩混勻。
 動物細胞:離心收集105-106個培養(yǎng)細胞,加入100 μl PBS重懸細胞,
 加入600 μl Lysis Buffer A,震蕩混勻。
 2、 加入10 μl Proteinase K,60 ℃水浴20 min~40 min,其間顛倒混勻數(shù)次。
 如需消化RNA,可待樣品裂解*后加入10 μl RNase A,混勻,室溫放置10 min。
  若加入樣品較多,可適當延長水浴時間,適量增加Proteinase K的量,按比例增加
  
Lysis Buffer ALysis Buffer B量。

 3、 加入400 μl Lysis Buffer B,漩渦震蕩30 s。
 4、 12,000 rpm離心5 min,將上清轉(zhuǎn)入離心柱中,靜置2 min。

上清可能出現(xiàn)少量白色漂浮物,此為未消化*的細胞和蛋白質(zhì)。

 5、 12,000 rpm離心1 min,棄廢液。
 6、 加入700 μl Wash buffer A(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000 rpm離心  1min,棄廢液。
 7、 加入700 μl Wash buffer B(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇), 12,000 rpm離  心  1min,棄廢液。
 8、 加入500 μl Wash buffer B,12,000 rpm離心1 min,棄廢液。
 9、 再次12,000 rpm離心2 min,將離心柱置于新的離心管中,并打開離心柱蓋,于室溫或37 ℃恒  溫箱放置5~10min,
 直至無明顯乙醇味。
 10、在硅基質(zhì)膜中央加入50~200 μl Elution Buffer或雙蒸水(事先預熱55~65 ℃),置于室  溫2  min,12,000 rpm離2 min。
 所得液體即為基因組DNA溶液。

 

 

 

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